临床PCR实验室污染的预防与清除

2019-07-24

临床PCR实验室污染的预防与清除

其实,临床PCR实验室污染无时不在,只是大多实验室没有把污染的监控纳入日常工作程序,因此即使有散在污染的发生,也较少采取措施或引起重视,只有发生严重污染无法报告时,才重视清除污染。分子生物学实验室应该本着“预防第一、清除第二”的观点,这样才能使工作“长治久安”。由于实验室污染涉及环节较多,现分几个专题进行讨论。

临床PCR实验室污染的预防与清除(一)
——实验室污染的发现与来源识别

 PCR实验室污染发生后如何被发现的?污染发生后如何进行污染物来源的识别?有哪些必要的措施?针对以上问题分析如下:

病人或医生对检测结果产生质疑,患者认为是阴性的样本,而结果为阳性;医生持续对检测结果表示质疑,感觉阳性率太高。此时,应该做污染识别实验,如设立试剂空白对照、多个阴性对照和弱阳性对照等进行识别。

 

1.1操作人员重新检查实验步骤,确定污染是否仅仅局限在阴性质控品,如果不能确定,至少应该将怀疑为污染的临床样本重新检测。

1.2 前后结果对比:对比过去随机检测的临床样本结果,如果有阴性样本逐渐减少趋势,应高度怀疑是否发生了实验室污染,应设立多个阴性质控品(3-5个)进行验证。

2.试剂盒的阴性质控品呈阳性扩增,但检测样本中尚有明确的阴性样本

检测样本全部为阳性,全部临床检测样本没有阴性结果,包括阴性质控品。

3.1重新检查实验操作过程,确定是否存在系统污染的存在,如核酸裂解液、漂洗液、离心管等是否存在携带污染,试剂中的组分如酶和反应液是否被高次方样本或标准品沾染。此时应立即设立试剂空白对照进行验证。

3.2系统污染的确认:设立3-5个纯阴性样本(建议采用献血员血浆或小牛血清)和3-5个弱阳性样本同步检测,如果阴性样本部分或全部阳性,且与弱阳性样本的定量值相近,即可确认为实验室存在系统污染。

污染的原因查找

4.1基因组核酸污染:发生在核酸制备过程或之后。鉴别方法:采用另一区域设计的引物和探针试剂盒检测同一样本,如果污染持续存在,说明污染来自于基因组核酸,应从核酸制备环节进行污染的清除。

4.2扩增产物污染:来自扩增产物的外泄或试剂盒使用的标准品,用不同区域的引物探针试剂盒进行检测,污染消失,证明污染来自扩增产物。

4.3仪器自动化核酸制备的污染问题:与生化和血细胞分析项目不同,PCR存在指数扩增的放大过程,因此对不同样本核酸的绝对隔离要求极高,目前所有全自动核酸提取仪器均难以避免污染的发生!仪器自动化核酸制备的污染主要来自提取核酸,清除方法比手工法实验室污染更为麻烦,需要设备厂家参与。


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